Biochemie für Diplomchemiker

• Titel: Biochemie für Diplomchemiker
• Organisation: UNI STUTTGART
• Seitenzahl: 96

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Inhalt

• Prakt2.pdf
• SDS-Gelelektrophorese
• Praktikumsskript Biochemie für Diplomchemiker
• Institut für Biochemie PD Dr Wolfgang Hilt Februar
• Praktikumsskript Biochemie für Diplomchemiker SS Sicherheitsinstruktionen
• Verhalten Sie sich generell umsichtig
• Biochemie Praktikum Proteinchemie
• Praktikum Biochemie Proteinbiochemie
• Tag Proteinbestimmung nach Bradford LDH Enzymaktivitätstest
• Erstellen einer Eichgerade für eine Proteinbestimmung nach Bradford
• Auswertung Erstellen der Eichgeraden auf Millimeterpapier Extinktion
• Proteinbestimmung nach Bradford
•  E AV t d VP VT n
• Errechnen von AS und AG Gesamtaktivität AG
• AG AV x V V Volumen ml U
• Spezifische Aktivität AS
• Tag LDHIsolierung aus Schweineherz
• IV V Affinitätschromatographie Ammoniumsulfatfällung ohne Vorfällung
• Adsorption an DiethylaminoethylDEAECellulose und nachfolgende Desorption
• COOH PROTEIN NH H H
• COO PROTEIN NH H H
• COO PROTEIN NH
• Arbeitsgang zur Trennung der LDHIsoenzyme
• SDSbeladenes entfaltetes Protein
• SDS Sodium dodecyl sulfate HCCH CHOSO Na
• Stryer Biochemistry Fifth Edition
• Versuchsdurchführung SDSPage nach U Laemmli Nature Lösungen
• Sammelgelpuffer M Tris SDS
• H O Acrylamid Trenngelpuffer APS TEMED
• Sammelgel ml l l l l
• H O Acrylamid Sammelgelpuffer APS TEMED
• Molekulare Zellbiologie Harvey Lodish Auflage Spektrum Akademischer Verlag
• MICHAELIS MENTEN KINETIK
• Für die Enzymreaktion wurde folgendes Modell aufgestellt
• k kcat Wechselzahl
• unter Berücksichtigung von Gl folgt
• vmax CS vmax KMCS KMCS
• Der reziproke Ausdruck hiervon lautet
• Abb Auftragung nach LineweaverBurk
• mM Phosphatpuffer pH Pyruvatlösg mgml Enzymlösg gml
• Start der Reaktion durch Zugabe der NADHLösung
• Verdünnungsreihe NADHStammlösg mM mgml
• Bestimmumg der Reaktionsgeschwindigkeit dh Volumenaktivität
• für Biologen und Chemiker
• BradfordTest LDHAktivitätstest LDHReinigung Tag SDSElektrophorese Isoenzyme Enzymkinetik
• Unterschrift des Assistenten
• Integrative HefeTransformationen Übersicht der Arbeitsschritte gap repair
• mit Kontrollen pos PRC pURA neg prc pURA
• Transformanten auf CMHis streaken Reinigungsausstrich
• Transformanten auf CMLeu patchen
• mit Kontrollen pos PRC pLEU neg prcLEU
• ReplikaPlattieren auf CMUramit Filter
• x je Einzelkolonie auf CMHis patchen OverlayEnzymtest
• alle Integranten haben noch CPYAktivität
• ReplikaPlattieren auf YPD alle auf FOA streaken
• ReplikaPlattieren auf CMLeumit Filter
• allen oder einigen Disruptanten fehlt CPYAktivität
• zusätzlich E coli Stämme mit pos neg Kontrollplasmid
• insgesamt Einzelkolonien aus streaks auf FOA patchen
• mit Kontrollen pos PRC neg prc
• PlasmidIsolation und Restriktionsanalyse
• qualitat Enzymtest in Mikrotiterplatten
• einigen Klonen fehlt CPYAktivität
• erfolgreiche Disruptanten für quantitat Enzymtest mitverwenden
• Integrative Hefetransformation ein Überblick
• TE steril AlkaliMinipräp
• TrisHCl pH MgCl NaCl Dithioerythritol Mercaptoethanol
• TAEElektrophoresePuffer mM TrisAcetat pH mM EDTA
• außer His Leu Lys
• Tag A Transformation von WCGHefezellen
• x TEPuffer x LiOAc Carrier DNA TNPuffer
• Immunoblotting WesternBlotting und Immunodetektion
• mM Tris mM Glycin MeOH
• CoatingLösung Milchpulver in TBST
• TBST mM TrisHCl pH mM NaCl Tween
• B Vermehrung von Einzelkolonien des gaprepairVersuchs
• C Ausstreichen der IntegrantenKlone auf FOA Platten
• BD U AS la c Z
• A Immundetektion der deglykosylierten CPY siehe Tag
• Lit MM Bradford Anal Biochem
• e Extinktionskoeffizient cmmol

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